Рейтинг:  0 / 5

Звезда неактивнаЗвезда неактивнаЗвезда неактивнаЗвезда неактивнаЗвезда неактивна
 

1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12

 

<< Назад

 

Для посева культуру выращивают 16-24 ч на чашке с неселективным (например, кровяным) агаром, прикасаются стерильной бактериологической петлей к верхней части 3-5 однотипных колоний микроорганизма, которые предполагают исследовать. Переносят этот материал в стерильный физиологический раствор. Если нужно произвести посев чистой культуры, берут полную бактериологическую петлю сливного роста и аналогичным образом суспензируют в 4-5 мл стерильного физиологического раствора. Сравнивают мутность раствора в пробирке с исследуемой культурой со стандартом мутности и приводят мутность бактериальной суспензии в соответствие со стандартом (0,5 единиц МакФарланда или 1-2х108 клеток/мл) путем добавления либо бактериальной массы, либо физиологического раствора. Приготовление микробной взвеси требуемой мутности является необходимым условием, обеспечивающим наличие сливного или почти сливного роста. Нельзя использовать в качестве инокулята неразведенные бульонные культуры или нестандартизованный инокулюм.

Посев материала на чашку с подсушенным агаром Мюллера-Хинтона желательно произвести не позднее чем через 15 минут после приготовления суспензии. Для этого стерильный тампон помещают в пробирку с посевным материалом. Излишнюю жидкость с тампона убирают путем прокручивания тампона, прижатого к стенкам пробирки над уровнем жидкости. Посев культуры производят штрихообразным движением по всей поверхности агара трижды, каждый раз после аппликации поворачивая чашку вокруг своей оси на 60°. В заключение делают несколько вращательных движений тампоном по краям агаровой поверхности. После этого посевам дают возможность подсохнуть в течение 3-5 минут (но не более 15 минут) при комнатной температуре в чашках с закрытыми крышками.

Заранее подобранные диски с антибиотиками можно наносить на засеянную чашку с помощью пары стерильных пинцетов. Целесообразно применять трафарет, чтобы расположить диски на чашке единообразно. На чашку Петри диаметром 9-10 см рекомендуется наносить 6-8 дисков. Каждый диск следует аккуратно прижать, чтобы обеспечить его контакт с питательной средой. Нельзя перемещать диск по агару, т. к. препараты могут быстро диффундировать (в этом случае лучше использовать новый диск). После завершения укладывания дисков чашки с посевами не позже чем через 30 минут следует поместить крышками вниз в термостат на 16-24 ч при 35-37°С (если температура превышает 35°С, это может привести к искажению результатов в отношении оксациллина/метициллина). В случае стафилококков и энтерококков требуется 24-часовая инкубация, что позволяет выявить их устойчивость к метициллину и ванкомицину, соответственно. Ни в коем случае не следует инкубировать посевы с неприхотливыми микроорганизмами в атмосфере углекислого газа.

После инкубации посевов оценивают характер роста в косопадающем свете, располагая чашку дном кверху над черным не глянцевым фоном. Правильно засеянная чашка имеет сливной или почти сливной рост и четкие зоны задержки роста с отсутствием видимого роста (если видны изолированные колонии, инокулюм был недостаточно густой и исследование желательно повторить). Измеряют диаметр каждой зоны задержки роста (включая диаметр диска) и записывают их размер в миллиметрах. Для этого удобно использовать линейку-лекало. Интерпретацию полученных результатов проводят в соответствии с пороговыми значениями диаметров, представленными в Приложении 3. Измерения делают с помощью линейки с обратной стороны поверхности чашки, не открывая крышку. Если среда непрозрачная, зону можно измерить с помощью штангенциркуля.

    Рис. 10. Линейка-лекало

О размере зоны задержки роста судят при просмотре посевов невооруженным глазом, и ее диаметр определяют от того места, где имеется начало микробного роста. Однако в трех случаях делают исключение:

 

- если в тестах с сульфаниламидами и ко-тримоксазолом появляется скудный рост внутри зоны задержки роста, такой рост не следует принимать во внимание;

- при исследовании бета-лактамазопродуцирующих стафилококков в отношении их чувствительности к пенициллину, если зоны задержки роста характеризуются конгломератами с четким краем, которые легко выявляются при сравнении с чувствительным контролем, то, независимо от размера зоны задержки роста, результаты следует оценивать как устойчивость;

- некоторые виды протеев могут прорастать внутрь зон задержки роста, образующихся вокруг некоторых антибиотиков, однако зона задержки роста обычно четко очерчена, а тонкими пластами ползучего роста следует пренебречь.

Чашки со стафилококками и энтерококками просматривают в проходящем свете. Любой различимый рост внутри зоны задержки роста вокруг дисков с метициллином и ванкомицином расценивается как устойчивость к метициллину и ванкомицину, соответственно

 

Далее>>

1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12

Все статьи